Edvotek kit nr. 222.
I dette forsøg arbejder man med plasmid transformerede bakterie. Ved hjælp af 2 forskellige plasmider indsættes henholdsvist et grønt eller blåt fluorescerende protein i E. coli bakterier. Den fænotypiske forskel på de to tranfsormerede bakterier kan observeres direkte på kolonifarven, men fremtræder tydeligst ved belysning med langt UV-lys. Se fremgangsmåden i billedserien.
Transformerede bakterier der har fået indsat pFluoroGreen og pFLuoroBlue kan findes ved dyrkning på LB-ampicillin holdig agar, og belysning med UV-lys.
VÆR OPMÆRKSOM PÅ SPECIELLE LOVKRAV TIL ANVENDELSEN AF DETTE KIT:
Brugen af dette kit til undervisningsbrug skal varetages af en gymnasielærer, der har gennemgået et kompetencegivende kursus af 2 dages varighed. Kurset omfatter arbejde med mikrobiologiske arbejdsmetoder, herunder sterilteknik og genteknologiske undersøgelsesmetoder, undervisning i god laboratoirepraksis samt affaldshåndtering.
Kurset udbydes af FaDB jf. https://biofag.dk/?page_id=2
Senest to uger før udførelsen af eksprimenter med genteknologisk modificerede organismer indberettes det planlagte eksperiment til fagkonsulent via fællespostkassen [email protected]. Skema til indberetning består af en forside (bilag 6) og en bilagsdel (bilag 1-4). Skema til indberetning af eksperimenter findes på Børne- og Undervisningsministeriets hjemmeside på https://www.uvm.dk/gymnasiale-uddannelser/fag-og-laereplaner/stx-laereplaner under bioteknologi.
De godkendte forsøg fremgår af bilagene til indberetningsskemaet, se aftalens bilag 1-4 jf. Indberetningsskema – bilag (pdf) på https://www.uvm.dk/gymnasiale-uddannelser/fag-og-laereplaner/stx-laereplaner under bioteknologi.
Materialer Til 10 grupper
Forsøgstid 45 min + 5 min Inkubering natten over
Udstyrskrav:
Inkubator
1-2 vandbade
Bunsenbrænder/kogeplade/mikrobølgeovn
Mikropipetter (5-50 µl) inkl. spidser
Pipettesuger
Markeringspenne
Varmeresistente handsker
Is til isbad
Lyskilde med langt UV-lys
Leveres med alle nødvendige prøvematerialer udover ovenstående udstyr. Transformationscellerne er frysetørrede, så sættet har en holdbarhed på ca. 9 måneder fra modtagelse. Leveres med alle nødvendige prøvematerialer, men uden ovenstående udstyr.
HUSK: at finde den nyeste øvelsesvejledning på Edvoteks hjemmeside via linket der medsendes kittet.
Ønsker man at arbejde med spektrofotometrisk bestemmelse angives følgende data fra Edvotek: Excitation peak: 473 nm Emission peak: 509 nm
